Enfermedad infecciosa por Pseudomona aeruginosa

Ácidos Nucléicos recombinantes en la naturaleza

Recientemente se concluyó la secuencia completa del genoma de la cepa PAO1, que es la cepa tipo de P. aeruginosa y que fue aislada de un paciente con otitis media. Esta secuencia ya se encuentra disponible en el internet y su análisis fue recientemente publicado. El tamaño aproximado del único cromosoma circular que forma el genoma de esta bacteria es de cerca de 6.3 millones de pares de bases, con mucho el de mayor tamaño de los genomas de bacterias secuenciados hasta ahora. Esta cepa, al igual que muchos otros aislamientos de P. aeruginosa, no contiene plásmidos.

 ADN recombinante  artificial 

T: Pseudomona aeruginosa. Vacunas: un reto a la investigación.

O: Lograr terapias alternativas para prevenir o combatir las infecciones producidas por P. aeruginosa.

G: Genes PAO1, OprF.

ER: No especifica

EL: DNA plasmídico recombinante.

V:  pSecTag, al virus de la influenza,

CR: Células 3T3.

MTG: Transfección genética reversa

MIC: Animales inoculados, evaluados por ELISA cuantitativo.

Gilleland en 1997 utilizó específicamente el péptido 10 (residuos 305-318) de la proteína nativa OprF para desarrollar un preparado vacunal, escogiendo al virus de la Influenza A como vector para presentar este epitopo en una vacuna humanamente compatible. Varias longitudes o fragmentos del epitopo del péptido 10 fueron insertados en el gen HA (hemaglutinina) del virus de la Influenza A/WSN/33, mediante un sistema de transfección genética reversa.

BIBLIOGRAFÍA:

1.- http://www.biblioweb.tic.unam.mx/libros/microbios/Cap3/

2.- http://scielo.sld.cu/pdf/vac/v13n1/vac01104.pdf (ANEXA PARA COMPARACIÓN DE AVANCES ACTUALES Y LO QUE SE CREÍA CON EL PASO DEL TIEMPO). ACTUALIZADO.

Secuenciación o una técnica de hibridación de enfermedad renal.

 

La secuenciación Sanger es un método muy sensible para la identificación de mutaciones, pero en cada experimento sólo permite secuenciar un solo fragmento de DNA de una longitud máxima de unos 1000 nucleótidos. Por ello, para el análisis mutacional de un gen es necesario secuenciar independientemente cada uno de los exones del gen (partes que codifican para proteína del gen). La selección del primer gen candidato a secuenciar viene determinada por las características clínicas del paciente y por el porcentaje de casos que explica cada uno de los genes (p. ej. en la PQRAD el análisis secuencial generalmente se empieza secuenciando el gen PKD1 causante del 78% de los casos, el segundo gen PKD2 causante del 15%, seguido de GANAB causante del 0,3% de los casos, DNAJB11 causante del 0,1% de los casos y en aproximadamente el 7% de los casos no se encuentra mutación en ninguno de estos 4 genes).

Actualmente, la secuenciación de Sanger continúa siendo el método utilizado en determinados casos:

• Diagnóstico de una enfermedad monogénica que no presenta heterogeneidad genética y cuyo gen causante está constituido por pocos exones. Un ejemplo sería la enfermedad de Fabry causada por el gen GLA con sólo 7 exones.
• Estudio de familiares de un caso índice, cuya mutación ya ha sido identificada, para confirmar/descartar la mutación identificada en el caso índice.
• Confirmar los resultados obtenidos por técnicas de secuenciación masiva

Bibliografía:

https://www.nefrologiaaldia.org/es-articulo-enfoque-genetico-enfermedades-renales-hereditarias-359

PCR de insuficiencia renal aguda.

Tema: Polimorfismos del sistema renina-angiotensina e insuficiencia renal.

 

Objetivos: Amplificar de forma selectiva secuencias específicas de DNA para poder detectar de forma simple y rápida ciertas cantidades de DNA para comparar con ciertas enfermedades, así dar diagnósticos concretos y acertados.

Tipo de muestra: Extracción de sangre.

Tipo de ácido nucleico: DNA, desoxinucleótidos (dNTPs).

Gen o secuencia por amplificar: Genes que codifican los componentes del SRAA: polimorfismo I/D del gen de la ECA, polimorfismo M235T, y el polimorfismo A1166C del gen del receptor tipo 1 de la angiotensina II.

Tipo de PCR: Reacción en la cadena de la polimerasa.

Visualización: Electroforesis.

El proceso de desarrolla en tres pasos:

• Desnaturalización: separación de las cadenas complementarias del DNA.
• Apareamiento o «annealing»: unión de los «primers» a sus secuencias complementarias.
• Extensión: síntesis de la hebra complementaria a partir del «primer» respectivo.

La repetición de este ciclo un determinado número de veces produce un aumento exponencial de la cantidad de la región diana del DNA, hasta que se llega a un punto en que disminuye la eficiencia de la enzima, y la reacción deja de ser exponencial.

 

Bibliografía :

1. https://www.revistanefrologia.com/es-genes-enfermedad-renal-i-generalidades--articulo-X0211699502027438
2. https://academic.oup.com/ndt/article/35/Supplement_3/gfaa142.P1737/5851991?login=true

Alteraciones de la Epigenómica de insuficiencia renal

 

Hablando de SALUD RENAL, podemos decir en términos generales que al ser los riñones órganos ENDOTELIALES, se convierten en el “albo” de los procesos inflamatorios y de “autoinmunidad patológica “ como respuesta a un sinfín de agresiones que se expresan clínicamente como la Hipertensión Arterial y/o como una pérdida paulatina de las funciones cuyo anuncio precoz es la aparición de proteína en la orina (de hecho es el examen de orina simple en donde podemos corroborar más del 90% de los diagnósticos de enfermedades renales).

Con la aparición de la EPIGENETICA ahora tenemos conocimiento del mecanismo de activación o desactivación de la vía de la Angiotensina hasta provocar la expresión o no, del gen de la NEFRINA, que puede ser modulado por la acción de fármacos inhibidores de la Angiotensina y así también podemos hablar de otro viejo fármaco , como es la Hidralazina, que también genera un beneficio en el control de la proteinuria al incidir sobre los mecanismos de metilación del ADN o Acetilación de las Histonas; provocando la inhibición o silenciamiento génico como efecto beneficio en el control de la enfermedad renal.

Bibliografía:

1. https://www.revistanefrologia.com/es-introduccion-epigenetica-nuevo-paradigma-nefrologia-articulo-X1888970017612260
2. https://digibuo.uniovi.es/dspace/bitstream/handle/10651/58275/TD_PaulaDiazBulnes.pdf?sequence=1